葡聚糖凝膠指的是由一定平均相對(duì)分子質(zhì)量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚橋形式相互交聯(lián)而成，具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，應(yīng)用面廣的一類凝膠，國(guó)外商品名為Sephadex。交聯(lián)度的大小，可通過(guò)控制交聯(lián)劑(一般為環(huán)氧氯丙烷) 和葡聚糖的配比以及反應(yīng)條件來(lái)控制。它是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。它的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

　　葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過(guò)程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級(jí)也可用于批量工藝。下面我就來(lái)給大家分享下它的使用方法：

　　1.乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干;

　　2.無(wú)鹽水浸泡：室溫下，在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹;

　　3.鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗至中性;

　　4.將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;

　　5.上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

　　6.凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可;

　　7.洗脫方法：可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

　　8.在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

　　儲(chǔ)運(yùn)特性：

　　1、未使用，室溫保存即可。

　　2、使用后保存方法如下：凝膠層析的載體不會(huì)與被分離的物質(zhì)發(fā)生任何作用，因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進(jìn)行下一次的分離操作。但使用多次后，由于床體積變小，流動(dòng)速率降低或雜質(zhì)污染等原因，使分離效果受到影響。此時(shí)對(duì)凝膠柱需進(jìn)行再生處理，其方法是:先用水反復(fù)進(jìn)行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進(jìn)行下一次分離。對(duì)使用過(guò)的凝膠，若短時(shí)間保存，只要反復(fù)洗滌除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，加入適量防腐劑即可;

　　3、若長(zhǎng)期保存，則需將凝膠從柱中取出，進(jìn)行洗滌、脫水和干燥等處理后，裝瓶保存。